【摘要】 目的：探讨受血者红细胞表面是否存在D抗原。方法：采用盐水试管法、间接抗人球蛋白法检测受血者红细胞表面D抗原。结果：受血者红细胞表面存在D抗原，但D抗原表达不完全，定为弱D型。结论：受血者若为弱D型应作Rh阴性论，输Rh阴性血。
【关键词】 Rh血型； 阴性； D变异型
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.080
在临床输血工作中，一般采用抗-D(IgM)单克隆试剂检测受血者Rh血型，极少能发现受血者D变异型，本例受血者因附属医院检验科与输血科检测RhD采用不同来源抗-D试剂，两科试剂检测结果不一致，才发现受血者为D变异型，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 受血者，男，49岁，2011年7月29日确诊为胃癌，术前备血，本地附属医院检验科检验血型A型RhD阳性，输血科检验血型为A型RhD阴性，因两个实验室的RhD检测结果不一致，送血站血型室进一步确认患者RhD血型。笔者所在科室采用间接抗人球蛋白法确认为D变异型，输RhD阴性血，无输血不良反应。
1.2 试剂与仪器 初筛选用抗-D(IgM)单克隆抗体(来源：上海血液生物医药有限责任公司，批号：20110218)；戴安娜微柱凝胶(批号：1107.02)；DiaMed，微柱凝胶(批号：50093.35.06)；确认试剂为抗-D1、抗-D2、抗-D3，抗-D1(IgG)；单克隆抗体(来源：上海血液生物医药有限责任公司，批号：20101022)；抗-D2(IgG+IgM，来源：美国美德声公司，批号：NDMG05602)；抗-D3(IgG+IgM，来源：Millipore UK，批号：BMH0806E)；BASO 2002-2离心机；电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂)。
1.3 方法 血型血清学方法，按试剂说明书采用盐水法、抗人球蛋白法检测[1]。
2 结果
2.1 受血者RhD初筛血型，医院检验科用戴安娜微柱凝胶法检测为RhD阳性。医院输血科采用Diamed微柱凝胶法检测为RhD阴性，血站血型室采用盐水凝集法检测为RhD阴性。
2.2 受血者RhD血型确认结果见表1。
表1 受血者RhD血型确认结果
注：“-”为抗-D试剂血清与受血者红细胞即抗原抗体反应不出现凝集，“2+或3+”为抗-D试剂与受血者红细胞即抗原抗体反应出现凝集
3 讨论
在红细胞29个血型系统中，Rh血型系统是最具复杂性和多态性的血型系统，在输血医学中的重要性仅次于ABO血型系统[2]。Rh血型系统抗原总数约有45种之多，主要抗原有D、C、E、c和e五种抗原，由于D抗原的抗原性最强，具有高免疫性而最具临床意义，因此，根据红细胞上D抗原的有无，将其分为Rh阳性或Rh阴性，其它抗原强弱依次为E>C>c>e的次序，均显示剂量效应。RhD血型在不同人种中的分布比例是有差异的，Rh阴性血型在我国汉族和蒙古族属稀有血型[3]。近年来通过研究发现，RhD抗原分为D阳性、D阴性和D变异型，而D变异型又分为弱D和部分D；弱D抗原的改变位于细胞膜内和膜中，细胞膜外的蛋白质没有改变，只有抗原数量的改变，而抗原质量未改变；部分D抗原的改变则位于细胞膜外，抗原性和数量都发生了改变[2]。本例受血者在常规盐水法初筛D抗原时为阴性，间接抗人球蛋白试验确认为阳性，证实存在D抗原，由于血型血清学方法只能检测抗原与抗体的反应，无法区别弱D和部分D。D抗原位于RhD基因编码的RhD多肽上，该多肽带有6个细胞外环，贯穿红细胞膜12次，氨基端和羧基端均位于胞浆中[4]。6个细胞外环中含有多个具有抗原性的抗原决定簇，当RhD基因发生突变、缺失，影响D抗原决定簇的质或(和)量的表达称之为D抗原变异型。国际输血协会(ISBT)根据D抗原将D表型分为五型：(1)D表型：即D抗原正常。(2)弱D(DU)表型：抗原数减少，抗原表位正常。(3)不完全D：抗原数量正常，但缺乏某些抗原表位。(4)不完全弱D：抗原数量少，同时缺乏某些抗原表位。(5)增强D：抗原数量明显增加，抗原性增强。
不同的商品化的抗D试剂与D抗原决定簇结合位点不同，即使对同一抗原决定簇反应，但其结合能力也有差别。这就是表达D抗原变异型红细胞与某些商品化的抗-D试剂在不同条件下反应格局不同的原因。本例受血者在医院检验科与输血科采用不同厂家微柱凝胶检测卡检测同一份血液，其结果不同，经过笔者所在站血型室进一步检测，在常规盐水法初筛D抗原时为阴性，间接抗人球蛋白试验确认为阳性，证实存在D抗原。
根据美国AABB技术手册第12版(1996)规定：Du这术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D(weakD)”，原称之Du红细胞一部分具有与正常D阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原D红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表位[5]。
本例受血者，在术中输4单位ABO同型的RhD阴性冰冻解冻去甘油红细胞。在临床输血中，未发生溶血性输血不良反应。
由于D变异型仍具有免疫原性及抗原性，因此，此类人群作为献血者视为RhD阳性，如果此类人群为受血者则视为RhD阴性。在受血者人群RhD血型检测时，由于微柱凝胶检测卡方法其灵敏度高，加之如果反应体系内加入广谱、高效价抗D试剂，易导致部分D变异型误定为阳性，而给患者输入RhD阳性红细胞血液制品，增加产生抗D抗体的几率。建议医院在对患者进行RhD血型筛查时选用单克隆试剂，并且采用盐水凝集法检测，有条件的医院应采用不同厂家的抗-D试剂进行检测，以确保输血安全。
总之，受血者采用常规盐水法初筛D抗原即可，如果为D阴性无需做间接抗人球蛋白确认试验，该受血者需要输注RhD阴性血液；供血者为D变异型应作RhD阳性论，不应当输血给RhD阴性的受血者，因此，在血站对供血者做Rh血型检测，检测出阴性的标本必须做确认试验，采用不同批次的抗-D血清进行间接抗人球蛋白实验，如果是阳性结果，表明D阳性，按Rh阳性血对待。
参考文献
[1] 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型血清学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社，1999:82-86.
[2] 孙国栋，王晓平.Rh血型系统弱D及部分D研究进展[J].临床输血与检验，2007，9(2)：183-185.
[3] 王华，张洪为，谭芳，等.RhD阴性患者血清学表型和不规则抗体筛查结果分析[J].中国医学创新，2011，8(2)131-133.
[4] 孙国栋，段现民，张彦平，等.中国人群众发现的主要弱D型-弱D15个体的分子背景研究[J].中国实验血液学杂志，2006，14(5)：1024-1028.
[5] 也应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].南京:东南大学出版社，2006:251.
(收稿日期：2012-03-07) (本文编辑：连胜利)