【摘要】 目的 检测HBV前S1蛋白（PreS1-Ag）的水平，分析与HBV-DNA复制的关系及其在早期诊断方面的价值。方法 用酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测HBV感染者血清中PreS1-Ag、HBV-M，HBcAb-IgM同时检测血清中HBV-DNA含量。结果 367例疑似肝炎患者中大三阳模式105例，HBV-DNA、PreS1-Ag，HBcAb-IgM阳性率分别为86%，82%和81%，三者差异无统计学意义；在248例小三阳模式血清中，HBV-DNA、PreS1-Ag，HBcAb-IgM阳性率分别为57%、65%和56%，三者差异无统计学意义。在14例疑似肝炎患者中，HBV全阴14例，HBV-DNA、PreS1-Ag，HBcAb-IgM阳性率分别为29%，29%和21%。结论 PreS1-Ag与HBV-DNA检测结果一致性较好，较HBeAg能更灵敏地反映体内HBV的复制状况；PreS1-Ag可以联合HBcAb-IgM检测，在HBV早期感染的诊断中发挥作用。
【关键词】 乙肝病毒；前S1蛋白；HBV-DNA；HBcAb-IgM；早期诊断
乙型肝炎前S区抗原与HBV感染、复制等相关关系研究显示前S1抗原在判断HBV复制和监测疗效方面具有重要的临床意义［2-4］本文对我院367例疑似HBV感染患者血清中的HBC-M、前S1抗原(PreS1Ag)、HBV-DNA和HBcAb-IgM进行了检测，并进行了统计分析，对前S1抗原的早期诊断价值进行了初步探讨，报道如下。1 材料与方法
1.1 研究对象 收集2011年01-06月我院门诊和住院的肝炎患者367例，其中男197例，女170例。所有标本采集空腹静脉抽血并分离血清后，-20℃储存备用。
1.2 方法血清标志物检测 用酶联免疫吸附技术（ELISA）分别检测HBV-M：(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，检测试剂购自北京万泰公司）、PreS1-Ag（检测试剂购自北京金豪）和抗HBC-IgM（检测试剂购自上海科华），检测具体操作按试剂说明书进行。HBV-DNA定量检测：HBV-DNA定量检测试剂购自（上海科华公司），仪器为（罗氏公司LightCycler检测仪）。检测操作及结果判断均按试剂说明书进行，结果判定拷贝数500为阳性。
1.3 资料整理与统计分析 采用Excel进行数据的录入，用SPSS13.0进行数据分析。分类资料以百分数表示，两组或多组率（或构成比）的比较采用x2检验或Fisher确切概率法。以α=0.05作为检验水准，P＜0.05作为判定有统计学意义的依据。2 结 果
2.1 前S1抗原与HBeAg、HBV-DNA及HBcAb-IgM的相关性 在367例肝炎患者中，血清标志物为大三阳模式（HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+））者105例，血清标志物为小三阳模式（HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+））者248例。在大三阳模式血清中，PreS1-Ag阳性率为82%，HBV-DNA阳性检出率为86%，HBcAb-IgM阳性检出率为81%，三者之间差异无统计学意义。在小三阳模式血清中，PreS1-Ag阳性检出率为65%，HBV-DNA阳性检出率为57%，HBcAb-IgM阳性检出率为56%。三者之间差异亦无统计学意义，见表1。
表1 ELISA法检测HBV-M，前S1抗原，抗HBC-IgM级荧光定量PCR检测结果（n/%）
两对半模式 N 前S1抗原阳性检出率 HBV-DNA阳性检出率 抗HBcAb-IgM阳性检出率 x2值 P值
大三阳 105 86（82%） 90（86%） 85（81%） 0.939 0.625
小三阳 248 161（65%） 142(57%) 138 (56%) 5.045 0.080
HBV-M全阴 14 4 (29%) 4(29%) 3 (21%)
合计 367 251 233 224
2.2 前S1抗原作为HBV早期诊断的价值 在367例疑似肝炎患者中，检出了14个两对半指标全阴的病例，ELISA法检测S1抗原发现有4例阳性，采用实时荧光定量PCR的方法验证4例均显示HBV-DNA阳性，采用ELISA法检测HBcAb-IgM抗体有3例显示该抗体阳性。3 讨 论
长期以来，临床上对乙型肝炎的诊断和治疗单纯依赖于对乙肝两对半的检测，到20世纪80年代末期，随着PCR技术的出现及成熟，乙肝两对半加HBV-DNA检测对乙型肝炎的诊断和治疗起着重要的监测和指导作用，而PCR技术由于其实验要求的高标准及高成本，使其在基层单位推广应用难以普及。有研究［5-6］指出，preS1 Ag、HBV-DNA、HBeAg几乎同时出现和消失，我们的研究也表明，preS1 Ag检出率与HBV-DNA检出率高度吻合。
在HBeAg阴性感染者中，往往存在C区基因变异，表现为在病毒基因组前C区末端1896位发生G-A点突变，产生一个新的终止密码子（TAG），阻断了HBeAg的形成［7］，从而不能表达出HBeAg，此类患者体内依然存在病毒复制，因而临床上不能仅依据HBeAg是否阳性来判断病毒的复制情况，这类患者预后往往较HBeAg阳性的患者差。PreS1-Ag的检测可避免因基因变异导致HBeAg阴性而产生的误导，可补充HBeAg的检出，更好地反映HBV在体内复制及感染的状况。
乙肝病毒侵入人体后，其抗原刺激机体免疫系统产生免疫应答，血中出现相应抗体，其中HBcAb-IgM出现较早。对105例大三阳患者进行HBcAb-IgM检测，其阳性率为81%，对248例小三阳患者进行HBcAb-IgM检测，其阳性率为56%。结果均显示了与preS1 Ag检测的一致性。这表明preS1 Ag可以联合HBcAb-IgM检测，以提示乙型肝炎病毒处于早期感染阶段。 病毒学研究表明，前S蛋白，包括前S1蛋白和前S2蛋白是乙肝病毒表面抗原(HBsAg)氨基端延长的一段多肽。前S1蛋白作为HBV外壳蛋白成分，一般与HBsAg共同表达。从理论上来说，pre-S1抗原应当可以作为HBV感染的一个早期诊断的指标，以此作为对部分HBsAg阴性病人检测的补充。
通常认为血清HBsAg阳性是判断HBV感染的主要依据，HBsAg阴转及抗-HBs的出现被认为是HBV感染趋向于恢复或HBV清除的标志，已无传染性，预后良好，然而，越来越多的证据表明，部分血清HBsAg阴性患者并不能排除已感染HBV，其具有传染性，并且部分患者仍可发生肝纤维化、肝硬化甚至肝癌［12］。谷茂林对24例HBV-M均阴性肝病患者检测血清HBV-DNA，结果发现6例阳性［13］。李凌华等研究了45例HBsAg阴性的乙肝病人，有15例已经发展到了重度肝炎或肝硬化［14］。由此可见虽然HBsAg可为HBV感染标志，但HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染。这也与本次研究有相似之处，在疑似的肝炎患者中，发现了14例HBV全阴的患者，但是进一步的检测发现有4例PreS1 Ag阳性，并且这4例经实时荧光定量PCR的方法均发现HBV-DNA阳性，ELISA法检测有3例HBcAb-IgM阳性，提示这4例是HBV早期感染的病例。
综上所述，PreS1Ag可作为HBV复制指标之一，同时在早期诊断方面也有一定的价值。对于HBV-M全阴的疑似乙肝患者，临床上可以考虑联合检测PreS1Ag和HBcAb-IgM，以防止漏诊，提高检出率。
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