谢仁芬 申晓东 邓荣界 刘阳丽 敖道娇 陈天美 李昌玉 杨群松
流行性感冒多数是因流感病毒引发的上呼吸道感染，一般表现为高热、全身酸痛、咳嗽、流鼻涕等，同时会伴有呼吸道症状［1］。流感病毒是一种RNA 病毒，为呼吸道感染的病原体之一，具人群普遍易感、季节性流行等特点［2］。该病毒传播迅速，在学校、幼托机构及养老院等人群聚集场所可爆发疫情，既往报道显示［3］，全球成人流感病毒感染率与患病率较高，每年季节性流感在全球可致300～500 万重症病例，其中约有29～65 万病例发生死亡，儿童为重症流感高危人群，患流感后病人发生严重疾病风险将会极大提高，严重威胁其生命安全。因此，了解流感发病的流行病学特征，对流感预防具重要意义。本研究对流感样病例鼻咽拭子分别行流感病毒阳性样本筛选及阳性毒株分离，以了解研究地区流感病毒监测情况及流行病学特征，旨在为该地区流感预防与诊疗提供可靠依据。
1.1 研究对象
选取2020 至2021年昭通市中医医院及送检的18 798 份流感样病例进行病原学监测，并将流感样病例（influenza-like illness，ILI）监测数据年龄、性别、职业、季节等进行录入，据《全国流感监测方案》［4］相关定义与标准，体温在38℃及以上且伴发咳嗽、咽痛其中一种症状为ILI。流感样病例暴发疫情报告标准［5］：同一集体环境如学校、集体单位等在1 周内发生ILI≥10 例。ILI 突发公共卫生事件：同一集体环境如学校、集体单位等在1 周内1 周内发生ILI≥30 例，或存在5 例及以上ILI（留观除外），或存在2 例及以上ILI 发生死亡。采集的标本均在48 h 之内送至流感监测网络实验室，于2～8℃环境保存，且防止反复冻融。接收标本的人员需在2 d 内于“中国流感监测信息系统”将“流感样病例标本原始登记送检表”录入其中。
1.2 方法
1.2.1 实验试剂与仪器
主要实验试剂与仪器：依据流感诊断相关标准指南［6］流感病毒核酸检测试剂由广州达安基因股份有限公司提供，胎牛血清（10100147-Gibco，澳洲）及赛默飞Nunc EasYFlask 细胞培养瓶，安誉AGS4800 型实时荧光定量PCR 仪，Nextera XT DNA 文库构建试剂盒（上海雅思创生物科技有限公司，规格：24samples）。
1.2.2 鼻咽拭子PCR 检测
采用real-time RT-PCR 技术与甲型/乙型流病毒分型的鉴定的特异性引物探针检测，PCR 扩增循环条件设置为：50℃15 分钟1 个循环、95℃15 分钟1 个循环、94℃15 秒→58℃45 秒（收集荧光）45 个循环。将检测结果为阳性的核酸标本筛选出来，进行进一步试验。
1.2.3 病原学监测
采用MDCK 细胞培养技术行流感病毒核酸阳性标本细胞分离，流感病毒MDCK 细胞分离步骤：①细胞维持液和病毒生长液配置；
②75%～90%成片细胞的准备（细胞需用Hank"s 液清洗3 遍）；
③细胞培养瓶的接种（细胞病变的特征是细胞肿胀圆化，细胞间隙增大，细胞核固缩或破裂，严重时细胞部分或全部脱落）；
④细胞培养物的收获：当75%～100%细胞出现病变时进行收获，收获之前可以将细胞放于-70℃冰箱，冻融1～2 次，以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应该于接种后第7 天收获。收获病毒液时，先温和摇动细胞瓶数次，然后用10 mL 的无菌移液管吸取病毒液置于15 mL 无菌离心管中，混匀病毒。收获的病毒液可以立即进行后续试验，或冻于-80℃冰箱待以后试验使用。并采用血凝抑制实验鉴定病毒毒株型号。
1.3 统计学方法
用SPSS 25.0 统计软件进行数据处理；
计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；
以P<0.05 为差异有统计学意义。
2.1 2020年～2021年昭通市中医医院及不同变量流感病毒分布情况与阳性率检出情况
18 798 份流感样病例鼻咽拭子共检出2 054份流感阳性标本，检出阳性率为10.93%（2 054/18 798）。鼻拭子、鼻炎抽取物和鼻洗液样本检出率较咽拭子样本检出率高，冬季检出率高于其他季节检出率，5～15 岁年龄段检出阳性率高于其他年龄段阳性检出率占比，学生流感病毒检出阳性率占真个阳性检出率高于其他职业流感病毒阳性率检出占比，差异有统计学意义（P均＜0.05）；
多数初诊首要诊断以急性上呼吸道感染、急性扁桃体炎、发热原因待查为主，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
表1 2020年～2021年及医院不同变量流感病毒分布情况与阳性率检出情况［n（%）］Table 1 Distribution of influenza virus and positive detection rate with different variables in hospitals between 2020 and 2021［n（%）］
2.2 2020年2月～2021年1月及各月份流感样病例ILI 病原监测情况
病原检测结果显示，流感病毒阳性检出率较高月份分别为2020年2月、12月及2021年1月，其中2021年1月检出率最高。ILI 病原甲型（A型）H1N1 居主要流行优势，乙型（B 型）BV 系居次要流行优势。2020年4～6月，ILI 病原甲型（A 型）H1N1 居主要流行优势，乙型（B 型）BV 系居次要流行优势；
2020年7～9月ILI 病原甲型（A 型）H2N3 居主要流行优势，乙型（B 型）BV 系居次要流行优势。见表2。
表2 2020年2月～2021年1月及各月份流感样病例ILI 病原监测情况Table 2 Surveillance of ILI pathogens between February 2020 and January 2021
本研究流感样病例病原检测结果与厦门［7］、南宁市［8］等地流感病毒监测结果相近。由于地理原因本研究与崔燕红等［9］研究乙型流感占据主要流行优势不同，我国南方多地如苏州、温州等乙型ILI 病原为主要流行毒株。另相关文献报道［10］，近年乙型流感病毒监测检出阳性毒株概率有上升趋势。分析其原因为，既往感染乙型流感病毒的人群相对较少，多数人体不具备相应病毒抗体，加上人员流动性大，气候多变，扩大了传播可能性，在适当情况下会引起乙型流感病毒大范围感染。
本研究结果显示，从样本类型看，鼻拭子、鼻炎抽取物和鼻洗液样本检出率较咽拭子样本检出率的高。有研究表明［11］，采集方式不同却直接影响着核算检测准确率，被采集者在口腔提取咽拭子时，会有严重的恶心反应，就有可能采不到咽后壁，因而会影响检出率；
从流行年龄段看，不同年龄段流感病毒检出率存在差异，5～15 岁年龄段检出阳性率明显高于其他年龄段，这与Jackson等［12］的研究结果基本一致。分析其原因，年龄在15 以下的人群存在免疫系统发育未完全的问题，加之处在学校等人群聚集场所，为流感病毒提供了较好的传播条件，从而明显提高了大范围感染风险。其次，已有研究结果显示［13］，年龄在5 岁以下的儿童乙型流感病毒为占据主要流行优势，可能是因为流感病毒为引发儿童社区获得性肺炎的重要病原之一。
从病原监测情况看，2020年4～6月，ILI 病原甲型（A 型）H1N1 居主要流行优势，乙型（B 型）BV 系居次要流行优势；
2020年7～9月ILI 病原甲型（A 型）H2N3 居主要流行优势，乙型（B 型）BV 系居次要流行优势，主要呈现甲型、乙型流感交替流行的趋势。这与Pițigoi 等［14］研究结果相一致。樊佩佩等［15］报道显示，我国南方城市流感爆发主要在冬季和春季，流感病毒阳性率检出高峰出现在冬季，由于病毒流行与气候及降雨情况有关，因而显示春季流行病毒感染率较高。本研究调查地区属于南方，气候较为温暖多雨，因而符合上述季节性流行趋势。
另外，不同职业及初诊首要诊断情况流感病毒检出率比较差异有统计学意义，学生流感病毒检出阳性率高于其他职业。分析其原因，学生与外界接触较多，学龄儿童为高感染风险人群，因此感染风险较其他职业高［16］。本研究，多数初诊首要诊断以急性上呼吸道感染、急性扁桃体炎、发热原因待查为主，提示诊断时当患者患有上述疾患时，需根据季节特点考虑流感发生可能性。
综上所述，2020～2021年昭通市中医医院及流感病毒阳性检出类型以甲型为主，乙型占据次要流行优势，其流行趋势与季节、人群年龄段、职业等情况相关，可根据毒株流行优势情况，对学龄儿童施行组织性流感疫苗接种，做好相关防护知识宣传，并采取有效措施来预防和控制疫情暴发流行。
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