叶慧萍
（上海市崇明区动物疫病预防控制中心，上海 202150）
鸡马立克氏病（Marek"s disease，MD）又名神经淋巴瘤病（Neurolymphomatosis），根据中华人民共和国农业农村部公告第573 号，属于三类动物疫病。该病是由疱疹病毒科、鸡马立克氏病病毒引起的一种以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病，该病主要侵害3～6 月龄的鸡，据报道，死亡率最高可达60%以上，临床病鸡表现为各内脏器官和组织形成肿瘤，严重影响其生产性能[1]。尽管该病早在1970 年就有疫苗，但全国各地仍不时有该病报道发生，给养禽业带来较大经济损失。
本文以上海市崇明本地一蛋鸡场暴发鸡马立克氏病为例，综合其流行病学调查、临床表现、剖解病变、实验室检测诊断、防控措施进行回顾性报道，以期为临床一线鸡马立克氏病的诊断与防治提供参考。
上海市崇明区某蛋鸡场，2022 年3 月从某农业公司引进海兰褐商品代鸡苗13500 只，鸡苗由供苗公司于1 日龄免疫鸡马立克氏病CIV988 液氮疫苗。鸡场进苗后严格遵循免疫程序及管理制度进行饲养。该批鸡前期生长发育良好，80 日龄左右出现个别鸡消瘦死亡，至180 日龄仍陆续零星鸡只消瘦死亡现象。
该批鸡于2022 年6 月初出现临床症状，表现为精神沉郁，缩颈呆立，羽毛松乱、失去光泽，食欲明显减退。后期6 月龄的病鸡明显消瘦，鸡冠苍白，个别鸡呈现单侧或双侧肢体麻痹，运动障碍，偶见劈腿状。病程延至数月，发病率和病死率约为20%。
图1 病例剖解图
经剖检发现，早期大多数患病鸡内脏器官有肉眼可见的灰白色病灶。肝脏尤为明显，显著肿大，呈暗红色，出现泥黄色坏死，有大小不等的灰白色结节；
脾大；
腺胃肿大，部分可见结节，腺胃内部糜烂，腺胃乳头呈溃疡状坏死；
肾脏明显肿大；
部分鸡心脏、肺脏肿大，部分见肺脏实变，偶有结节；
发病后期剖解病死鸡内脏心、肝、脾、肾未发现明显的结节，少数产蛋鸡卵巢有结节。
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试剂
马立克氏病毒（MDV）核酸检测试剂盒（荧光-PCR 法），购自百狮园动物保健科技（广州）有限公司；
禽白血病病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒，购自北京生科尚仪科技有限公司。鸡马立克氏病标准阳性血清及抗原，均购自中国农科院哈尔滨兽医研究所。核酸提取试剂盒（磁珠法病毒DNA/RNA 提取），购自TIANGEN 公司。
4.1.2 仪器与设备
Precellys24 均质器；
CTISE 日立高速离心机；
KingTiskv 核酸提取仪；
RocheLightCycler480 PCR 仪。
4.1.3 样本采集与处理
剖解10 只病死鸡，无菌剪取心、肝、脾、肾脏、肺、腺胃等各5g。分别剪取3 个不同的位置称取样品1g，剪碎混匀后再研磨，加入生理盐水洗2 次，8000rpm 离心2min，取上清液100μL 于灭菌离心管中。10 套病死鸡内脏，4 套送上海市动物疫病预防控制中心检测，6 套由本中心实验室完成检测。
4.1.4 检测依据
马立克氏病检测依据参考GB/T 18643-2021 《鸡马立克氏病诊断技术》，禽白血病检测依据参考GB/T 26436-2010 《禽白血病诊断技术》。
4.1.5 羽毛琼脂免疫扩散试验检测
拔取4 只发病鸡颈部或背部的羽髓，每只鸡取3份，剪去羽毛，留用其羽髓插入琼脂孔，用作琼脂免疫扩散试验。具体操作步骤按照GB/T 18643-2021《鸡马立克氏病诊断技术》 要求进行。
4.1.6 核酸提取及检测
参照TIANGEN 的磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒说明书提取病毒DNA/RNA。荧光定量PCR 参照禽马立克氏病毒（MDV）核酸检测试剂盒（荧光-PCR 法）和禽白血病病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒开展病毒核酸检测。普通PCR 参照 《GB/T 18643-2021 鸡马立克氏病诊断技术》，开展meq 基因和132重复序列核酸检测，其中132 重复序列判定野毒感染目的片段大小为317bp。
4.2 检测结果
4.2.1 羽毛琼脂扩散试验
12 份羽髓样本中，10 份可见明显沉淀线，阳性率为83.33%。阳性检测结果见图2。
图2 羽毛琼脂扩散试验结果
4.2.2 病原核酸检测
由表1 和图3 可知，10 套病死鸡内脏，其市疫控中心检测结果3 份样品核酸马立克阳性，阳性率75%；
禽白血病未检出。本中心检测结果为6 份马立克阳性，阳性率100%；
禽白血病未检出。本实验室检查结果与市疫控中心检测结果基本一致。
表1 10 份样品核酸检测结果
图3 马立克氏病鸡样品核酸132 重复序列检测结果
4.3 结果判定
根据流行病学特征，结合其临床症状、剖检病变，可初步诊断为鸡马立克氏病。经实验室诊断，通过PCR 检测和琼脂免疫扩散试验检测，排除禽白血病，确诊为鸡马立克氏病。
（1）临床上，鸡马立克氏病尚无有效的治疗方法，一旦发病需全群淘汰，给养殖户带来较大的经济损失。因此，有效预防和诊断鸡马立克氏病对养鸡业生产意义重大。
（2）马立克氏病疫苗的接种能有效预防发病，但接种疫苗到产生保护力至少需要一周的时间，所以雏鸡出壳后要重视雏鸡早期感染。育雏室需远离其他年龄的鸡群。出雏前，育雏室需彻底清扫和严格消毒，评估消毒效果后再放入雏鸡，育雏期专人饲养，饲养员之间防止串棚，进入育雏室更换衣物和鞋，做好人员和育雏室消毒工作，禁止无关人员进出。
（3）做好检疫工作，及时扑杀患病鸡群。病死鸡由执法大队统一收集送市无害化处理中心进行无害化处理。
（4）加强鸡场消毒工作，切断传染源。鸡场应建立消毒制度，每月1 次对全场环境开展彻底消毒，对进出场人员和车辆做好登记和消毒工作，棚舍内坚持每天消毒，清除积污水、粪便、受污染物，避免其他棚舍内的鸡群感染[2]。消毒可采取喷雾、熏蒸、喷洒、带鸡消毒等方式，可用石灰粉对鸡舍墙壁、地面、屋顶进行白化消毒，也可用葵甲溴铵碘复合溶液、5%聚维酮碘等对场地、用具、鸡只消毒。
（5）鸡场要坚持自繁自养原则，预防因引种带来的疫病传播风险。此外，还需建立并严格落实全进全出的管理制度，避免混养。鸡舍内要安装如通风、换气和温控等设施预防各种应激，在饲料中可适当添加微量元素，以增强鸡的抵抗力，预防免疫抑制性疾病，避免各类疫病共感染或混合感染。
（1）鸡马立克氏病疫苗防控历史已比较悠久，自20 世纪70 年代实现该病的疫苗防控以来，临床发病率得到了显著降低，很大程度地给养殖户减少了经济损失[1]。但通常免疫接种不能完全彻底地防止发病，据目前文献报道，该病一般疫苗保护率为80%左右，未能达到100%防护，特别是近些年超强毒株的报道时有发生，致使近几年仍有不少鸡场存在不同程度发病[3]，给养殖户并造成不少的经济损失。
（2）本次发病鸡场有严格的管理制度，严格执行免疫程序及生物安全措施，建场20 多年未曾发生过马立克氏病。本次发病鸡是由供苗厂家免疫马立克氏病疫苗，分析免疫失败的原因，是供苗单位还是本场因素造成的，病毒血清型变异、早期感染、疫苗质量问题、注射剂量和方法、免疫抑制性因素、母源抗体干扰和应激因素等等。
（3）一旦鸡场感染马立克氏病，病鸡大多为终生带毒，病毒会源源不断地从脱落的羽毛囊皮屑中排出，散布在空气中，这是造成本病难于控制的最根本性的原因[4]。一旦发病，扑杀发病鸡群，消灭传染源。但鸡场往往考虑经济效益，舍不得全群扑杀，该鸡场截至8 月底已发病3 个月，每天仍有零星鸡只死亡，死亡鸡只仍能检出马立克氏病病毒。对今后净化工作会带来一定的困难。
（4）加强饲养管理，采取措施减轻应激，增强鸡体抵抗力，加强对传染性法氏囊、禽白血病等免疫抑制性疾病的免疫及预防，对预防本病的发生有很大的作用。
（5）病鸡和可疑鸡可通过粪便、羽毛等方式将病毒排泄到环境中传播，除做好日常消毒工作外，要有粪污处理设施设备，宜采用堆肥发酵方式对粪污进行充分发酵处理，杀死病毒。
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