陈建豪，买吾兰，段进刚，张国新，坤巴哈斯，杨夷平，杨 康，阿达来提，古丽巴哈，马春江
（新疆哈密市动物疫病预防控制中心，新疆 哈密市 839000）
口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种感染偶蹄目动物的急性、热性、接触传染性动物疫病，感染患畜出现高热、特征性水疱，幼畜出现出血性胃肠炎和心肌炎[1]。口蹄疫病毒有7个血清型:A、C、O、SAT1、SAT2、SAT3、AsiaI型。该病是世界动物卫生组织（OIE）规定必须报告的传染病之一，我国列为一类动物疫病，严重危害畜牧业健康发展。目前，口蹄疫在世界范围内广泛流行，疫苗免疫仍然是控制该病的最有效措施[2，3]。尽管在新型疫苗和佐剂改良等方面的研究取得了显著的进步，但在全球范围内使用最多的口蹄疫疫苗还是口蹄疫全病毒灭活疫苗[4]。
为研究口蹄疫和小反刍兽疫疫苗联合免疫对动物的保护情况，掌握不同厂家口蹄疫疫苗临床免疫效果，本试验在哈密市某规模羊场和牛场开展口蹄疫O型、A型二价灭活苗免疫效果的研究，以期客观的评价不同厂家口蹄疫疫苗质量，为免疫程序的优化和免疫方案的制定提供科学依据。
1.1 试剂和疫苗
口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，批号：20210922101-7；
口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，批号20210926103-4，试剂生产厂家均为兰州兽研生物科技有限公司；
三种牛羊口蹄疫O型、A型二价灭活苗和小反刍兽疫疫苗均源于2021年自治区招标采购中标厂家。
1.2 试验动物
选取哈密辖区某规模羊场30日龄左右、同一品种、体质均匀的羔羊80只，平均分为4组；
选取某规模牛场90日龄左右、同一品种、体质均匀的犊牛45只，平均分为3组，各场实验期间饲养管理方法一致。
1.3 实验方法
1.3.1 免疫分组
按照重大动物疫病强制免疫方案和疫苗说明书进行免疫注射，首免当天前3组实验羊分别免疫E、F、G三个不同厂家的口蹄疫二价灭活疫苗，同时免疫小反刍兽疫疫苗，第4组实验羊免疫G厂家疫苗，不免疫小反刍兽疫疫苗，所有实验羊28 d后强化免疫口蹄疫疫苗。实验牛首免当天3组分别免疫E、F、G三个不同厂家的口蹄疫二价灭活疫苗，28 d后强化免疫。疫苗免疫后随时观察并记录试验动物的临床表现。
1.3.2 样品采集
分别于首免当天、一免后28 d和强化免疫后28 d每组采集血液样品15份，无菌分离血清后-20℃保存。
1.3.3 样品检测与判定
口蹄疫O型和A型病毒抗体均采用液相阻断ELISA检测方法进行检测，根据试剂盒使用说明判定口蹄疫O型和A型抗体合格率。判定标准：当抗体效价≥1:128，被检血清判为抗体合格，当抗体效价＜1:128，被检血清判为抗体不合格。
2.1 羊口蹄疫O型免疫抗体检测结果
首次免疫当天各组口蹄疫O型抗体处于较低水平，E组抗体合格率为15%，平均抗体效价为1:35.20，抗体F、G1、G2组抗体合格率为20%，抗体效价分别为1∶62.40、1∶73.60和1∶60.80。一免后28 d，抗体效价由高到低分别为F组（1∶145.07）、E组（1:142.93）、G1（1∶106.67）和G2（1∶104.53），合格率分别为66.67%、46.67%、46.67%和53.33%。二免后28 d，四组实验口蹄疫O型抗体合格率均为100%，抗体效价由高到低分别为F组（1∶588.80）、E组（1∶512.00）、G1组（1∶418.13）和G2组（1∶315.73），结果如表1所示。
表1 羊口蹄疫O型免疫抗体检测结果
2.2 羊口蹄疫A型免疫抗体检测结果
首次免疫当天各组口蹄疫A型病毒抗体处于较低水平，抗体合格率为10%～30%，抗体效价在1:33.60和1∶73.60之间。一免后28 d，抗体效价由高到低分别为F组（1∶160）、G1（1∶85.33）、G2（1∶77.87）和E组（1∶69.33），合格率分别为66.67%、26.67%、40.00%和20.00%。二免后28 d，抗体效价由高到低分别为F组（1∶302.93）、G1组（1∶290.13）、G2组（1∶262.40）和E组（1∶177.07），抗体合格率分别为93.33%、100%、86.67%和73.33%。见表2。
表2 羊口蹄疫A型免疫抗体检测结果
2.3 牛口蹄疫O型免疫抗体检测结果
首次免疫当天各组口蹄疫O型病毒抗体合格率为0%，抗体效价分别为1∶12.27、1∶19.73和1∶24.00。一免后28 d，E组O型抗体效价为1:165.33，抗体合格率为46.67%，F组O型抗体效价为1∶125.87，抗体合格率为40.00%，G组O型抗体效价为1:110.93，抗体合格率为53.33%。二免后28 d，E组O型抗体效价为1∶554.67，抗体合格率为100%，F组O型抗体效价为1∶441.60，抗体合格率为86.67%，G组O型抗体效价为1∶610.13，抗体合格率为93.33%，结果如表3所示。
表3 牛口蹄疫O型免疫抗体检测结果
2.4 牛口蹄疫A型免疫抗体检测结果
首次免疫当天各组口蹄疫A型病毒抗体合格率为0%，抗体效价分别为1∶11.20、1∶10.13和1∶18.13。一免后28 d，E组A型抗体效价为1∶77.87，抗体合格率为33.33%，F组A型抗体效价为1∶162.13，抗体合格率为40.00%，G组A型抗体效价为1∶192.00，抗体合格率为53.33%。二免后28 d，E组A型抗体效价为1∶358.40，抗体合格率为86.67%，F组A型抗体效价为1:819.20，抗体合格率为100%，G组A型抗体效价为1∶599.47，抗体合格率为93.33%，结果如表4所示。
表4 牛口蹄疫A型免疫抗体检测结果
目前，在我国口蹄疫主要流行O型和A型2个血清型，O型Mya-98毒株和PanAsia毒株以及A型Sea-97 G2毒株，均为周边国家（地区）流行的毒株[5-7]。在西亚和南亚等主要流行地区动物防疫水平较差，引发疫情的毒株较为复杂，传播流行较为广泛，国内存在田间传播路径不明，跨省调运动物频繁，疫苗免疫良莠不齐等[8]问题，都为我国口蹄疫的防控增添了困难。一旦外来病流入，缺乏足够的重视和准备，必将造成巨大的经济损失，所以多种毒株的疫苗储备、新型疫苗的研发、田间实验的验证对疫情的防控、扑灭起到非常重要的作用。
吴建华等[9]通过将2018年口蹄疫和小反刍兽疫疫苗传统免疫方法免疫与2019年、2020年联合免疫方法免疫相比较，结果显示，2019年和2020年口蹄疫和小反刍兽疫的免疫抗体合格率均有所提升。米耀云等[10]开展口蹄疫疫苗、小反刍兽疫疫苗和山羊传染性胸膜肺炎疫苗分点同时免疫实验，结果表明3种疫苗联合免疫时都获得了良好的免疫效果。本实验中口蹄疫疫苗单独免疫组G1组与口蹄疫和小反刍兽疫疫苗联合免疫G2组进行比较，联合免疫组与单独免疫组免疫抗体效价和抗体合格率都较为相近，且都没明显的免疫副反应发生，表明口蹄疫和小反刍兽疫疫苗联合免疫具有良好的免疫效果和较好的安全性。因此开展多种疫苗联合免疫，分析评估疫苗免疫效果和安全性，对于节约人力、物力成本，增强动物福利，提高免疫效率，都具有重要的推广和指导意义。
杨国丽等[11]对公牛口蹄疫O-AsiaI型二价灭活疫苗跟踪监测显示，种公牛口蹄疫O型免疫效果优于AsiaI型。邓飞[12]等对羊进行口蹄疫O-AsiaI型二价灭活疫苗免疫试验表明，三个厂家的疫苗免疫后均是O型抗体水平高于AsiaI型抗体水平。本实验中利用液相阻断ELISA检测口蹄疫O型、A型抗体时，羊口蹄疫O型抗体合格率和抗体效价明显高于A型抗体合格率和抗体效价，不同疫苗各组之间O型抗体效价也高于A型抗体效价。牛口蹄疫O型与A型抗体合格率和抗体效价相比，其中E组和G组疫苗口蹄疫O型抗体效价高于A型抗体效价，O型抗体效价组间差异不明显（P＞0.05）；
F组A型抗体效价高于O型抗体效价，A型抗体效价组间差异较大（P＜0.05）。分析原因可能是二价灭活疫苗抗原自身的免疫原性存在差异，对于不同动物抗体产生水平差异可能较为明显。
实验表明，三个厂家生产的口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗都能较好的刺激动物机体产生抗体，没有明显的免疫副反应。一免后28 d，抗体合格率和抗体效价依旧不高，必须进行强化免疫。二免后28 d口蹄疫O型、A型抗体效价均能达到较高水平，抗体合格率符合农业部70%以上的要求，但不同厂家疫苗免疫效果依然存在一定的差异。通过综合比较三种口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗免疫牛羊后的抗体效价和抗体合格率，G组疫苗的免疫抗体合格率最高，O型、A型抗体效价较为均衡，免疫效果较好。通过开展口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗免疫效果评价，量化评估不同厂家疫苗质量，可以很好的指导实际生产，选择优质疫苗，保证免疫效果和质量。
当然，影响疫苗免疫效果的因素有很多，如免疫技术、疫苗质量、动物品种等，在很多外部条件同等的情况下，动物个体之间的差异也会造成很大影响。这就需要通过持续的抗体水平监测，了解本场动物抗体消长规律，制定适合本场的最佳免疫程序，做到科学精准防控。
口蹄疫和小反刍兽疫疫苗联合免疫，具有良好的免疫效果和较好的安全性。口蹄疫二价灭活疫苗抗原自身的免疫原性存在差异，对于不同动物抗体产生水平差异可能较为明显。综合比较三种口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗免疫牛羊后的抗体效价和抗体合格率，G组疫苗免疫效果较好。
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