王 晨，游治杰，童康梅，陈 新，陈小岩
边缘区淋巴瘤(marginal zone lymphoma,MZL)是起源于B细胞的一种低级别淋巴瘤，MZL一般只能在排除其他低级别B细胞淋巴瘤后做出诊断[1-2]，尤其是淋巴结内MZL，缺少特异性抗体及分子遗传学改变，诊断比较困难。文献报道[3-6]免疫受体易位相关蛋白1(immune receptor translocation-associated protein 1，IRTA1)和髓系核分化抗原(myeloid nuclear differentiation antigen,MNDA)对MZL的诊断具有一定价值。目前，国内有关IRTA1、MNDA蛋白，在MZL和其他低级别B细胞淋巴瘤中表达及相关性研究尚未见报道。本文收集94例低级别B细胞淋巴瘤，采用免疫组化法检测IRTA1和MNDA的表达，探讨两者对MZL的诊断及鉴别诊断的价值，为临床与病理医师提供参考。
1.1 临床资料收集2005年1月～2019年1月福建医科大学省立临床医学院/福建省立医院病理科94例低级别B细胞淋巴瘤，其中男性55例，女性39例，年龄15～88岁，平均61.5岁。94例低级别B细胞淋巴瘤，包括15例边缘区淋巴瘤(nodal marginal zone lymphoma,NMZL)，21例黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(extranodal marginal zone lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissues,MALT)，3例脾脏边缘区淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma,SMZL)，5例骨髓淋巴浆细胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphomas,LPL)，20例低级别滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)，15例套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphomas,MCL)，15例小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞性白血病(small lymphocytic lymphoma/chronic lymphocytic leukaemia，SLL/CLL)。参考WHO(2017)淋巴造血系统肿瘤标准进行分类[7]。所有病例经3位高年资病理医师共同复阅。
1.2 方法
1.2.1免疫组化法 标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，经HE、免疫组化染色。抗体Anti-IRTA1(1 ∶400)、Anti-MNDA抗体(1 ∶600)，均购自Abcam公司。免疫组化EliVision 试剂盒，购自福州迈新公司；
具体操作步骤按试剂盒说明书进行。实验均设阴阳性对照。
1.2.2PCR法 一代(Sanger)测序验证：针对MYD88基因的第4号外显子设计特异的上、下游引物，上游引物序列：5′-GCATCTCCTCCTAGCTGTGC-3′；
下游引物序列：5′-AAG GCTGACAATCCAGAGGC-3′，PCR 反应条件第一阶段：95 ℃预变性 5 min；
第二阶段：95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s，40个循环；
第三阶段：72 ℃ 5 min。PCR反应试剂盒购自美国Promega公司。5例骨髓LPL均为活检病例，均经PCR证实有MyD88 L265P突变基因扩增。
1.3 结果判定低级别B细胞淋巴瘤和正常对照记录染色区域采用双盲法对染色结果进行评估。IRTA1细胞膜染色有清晰的淡黄色至棕黄色颗粒为阳性；
MNDA细胞核染色有清晰的淡黄色至棕黄色颗粒为阳性。每例随机观察5个高倍视野(×400)，每高倍视野计数100个瘤细胞，计算阳性细胞百分率。IRTA1和MNDA均超过20%的肿瘤细胞膜/核染色为阳性，小于20%为阴性[3,6]。
1.4 统计学分析所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。计数资料比较采用 χ2检验、Fisher确切概率法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 低级别B细胞淋巴瘤中IRTA1的表达MZL肿瘤组织中IRTA1阳性率为48.7%(19/39)，与非MZL病例阳性率(1.8%，1/55)比较，差异有显著性(P<0.05)。MZL各组中IRTA1阳性率分别为NMZL(53.3%，8/15)、MALT(47.6%，10/21)和SMZL(33.3%，1/3)，差异无统计学意义(P>0.05，表1、2)。在非MZL病例中出现1例IRTA1阳性为低级别FL，主要位于肿瘤滤泡内，约30%的细胞阳性。IRTA1在结节为主的MZL阳性率为63.3%(19/30)，而在弥漫型的MZL中阳性率为0(0/9)，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 低级别B细胞淋巴瘤中MNDA的表达MZL肿瘤组织中MNDA阳性率为61.5%(24/39)，与非MZL阳性率(50.9%，28/55)比较，差异无显著性(P>0.05)。MNDA在低级别FL中的阳性率明显著降低，仅为15.0%(3/20)，与MZL中的阳性率(61.5%，24/39)相比，差异有显著性(P<0.05)。在MZL各组中MNDA的阳性率分别为NMZL(66.7%，10/15)、MALT(61.9%，13/21)和SMZL(33.3%，1/3)，差异无统计学意义(P>0.05)。MNDA在MCL、SLL/CLL和骨髓LPL中的阳性率分别为73.3%(11/15)、73.3%(11/15)和60.0%(3/5)，与MZL的阳性率比较，差异均无显著性(P>0.05，表1、2)。
表1 低级别B细胞淋巴瘤中IRTA1、MNDA的表达
2.3 MZL中IRTA1、MNDA表达与临床病理特征的关系IRTA1在低级别B细胞淋巴瘤中的主要表达于MZL中，在其他类型的低级别B细胞淋巴瘤较少表达。MZL中单核样细胞中等大，胞质丰富，核呈圆形、卵圆形，呈“煎蛋样”形态，IRTA1在MZL主要表达于具有单核样分化的B细胞，呈胞膜弥漫表达(图1、2)。在低级别FL和MCL中，IRTA1不表达。MALT在具有边缘区分化的单核样瘤细胞中IRTA1呈多量染色阳性。MNDA主要表达于非FL的低级别B细胞淋巴瘤，包括MZL、MCL 和SLL/CLL阳性病例，尤其是MCL中，细胞呈中心细胞样形态，核分裂象较易见，MNDA可见肿瘤细胞核弥漫一致的表达(图3、4)。在结节为主型的低级别FL中，呈现背靠背的结节状组织学结构，MNDA几乎不表达于结节内的肿瘤细胞，只在结节周围有少量细胞细胞核表达(图5、6)；
以弥漫模式为主的低级别FL中不表达MNDA。
表2 低级别B细胞淋巴瘤中IRTA1、MNDA的表达差异性
图1 边缘区淋巴瘤：单核样B细胞分化，胞质丰富，核呈圆形、卵圆形，呈“煎蛋样”形态 图2 边缘区淋巴瘤：IRTA1在单核样B细胞分化区及周围呈弥漫一致阳性，EliVision法 图3 套细胞淋巴瘤：中心细胞样细胞，核分裂象较易见 图4 套细胞淋巴瘤：MNDA在肿瘤细胞弥漫阳性，EliVision法 图5 低级别滤泡性淋巴瘤：瘤细胞呈背靠背的结节状分布 图6 低级别滤泡性淋巴瘤：MNDA在肿瘤性结节周围少量阳性，EliVision法
在常规病理工作中，大多数低级别B细胞瘤可以通过形态学、免疫表型以及一些特殊的遗传学改变可以做出明确诊断。但MZL的诊断具有挑战性，一些CD5和CD10均阴性的低级别B细胞淋巴瘤，尤其是丢失生发中心标记的低级别FL，与MZL难以鉴别。虽然MALT1基因易位对MALT具有一定特异性，但其遗传学特征更多见于特定器官：肺(40%)、胃(30%)、眼附属器(15%)，其他部位如涎腺、甲状腺和皮肤则较罕见[8-9]。因此，MZL缺少特异性免疫组化标记和有效分子学异常特征，通常只能排除其他低级别B细胞淋巴瘤后诊断。
IRTA1是免疫球蛋白超家族成员[4]，有文献报道NMZL中IRTA1的阳性率为67%～73%和MALT中IRTA1阳性率为93%[4,10]。本组MZL中IRTA1阳性率为48.7%(19/39)，非MZL中阳性率为1.8%(1/55)，两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。这些实验数据表明IRTA1在MZL中的表达具有特异性，但敏感性较差。本组数据与文献报道有所不同，可能与样本量差异较大有关(本组SMZL和 LPL数量较少)，具体还需要我们后期扩大样本进一步分析。
MNDA是一种干扰素应答蛋白，已证实MNDA可在良性脾脏边缘区B细胞、良性增生的单核样B细胞中表达[6]。本组MZL中MNDA阳性率为61.5%(24/39)，非MZL中其阳性率为50.9%(28/55)，两者相比差异无显著性(P>0.05)。然而，MNDA在低级别FL中的表达显著降低，仅为15.0%(3/20)，与MZL的阳性率存在明显差异性(P<0.05)。因此，MNDA免疫组化染色更适用于MZL与低级别FL的鉴别诊断，而对于MZL与其他低级别B细胞淋巴瘤的鉴别诊断没有帮助。
本实验还发现IRTA1在结节为主的MZL阳性率为63.3%(19/30)，明显高于弥漫型的MZL (P>0.05)。这可能与结节型的MZL中较多的单核样B细胞分化有关，笔者也推测CD21阳性的滤泡树突细胞，可能上调了IRTA1的表达。由于其病例数较少且分型具有一定主观性，具体机制有待进一步证实和探讨。
综上所述，IRTA1对于鉴别MZL和非MZL更具有特异性，而MNDA对于排除低级别FL更有价值。因此，两者联合应用对于低级别B细胞淋巴瘤的诊断，尤其是MZL和低级别FL的鉴别诊断有重要价值。本实验采用免疫组化检测两个抗体，操作简便易行，更适合常规病理诊断工作中使用，建议在低级别B细胞淋巴瘤的鉴别诊断中行免疫组化检测IRTA1、MNDA的表达。
猜你喜欢 单核免疫组化淋巴瘤 HIV相关淋巴瘤诊治进展传染病信息(2022年3期)2022-07-15新疆野生阿魏菇原生质体的再生与单核菌株交配型测定新疆农业科学(2022年5期)2022-06-15以皮肤结节为首诊表现的滤泡性淋巴瘤转化为弥漫性大B细胞淋巴瘤一例新医学(2022年4期)2022-04-23专业设计8核U哪家强？这款锐龙很无敌！电脑报(2021年8期)2021-07-01免疫组化病理技术及质量控制方式的研究医学食疗与健康(2021年27期)2021-05-1315W笔记本处理器性能排行电脑爱好者(2020年24期)2020-12-22朗格汉斯组织细胞增生症的诊治进展医学信息(2019年19期)2019-11-15病理科为什么要做免疫组化学习与科普(2019年15期)2019-09-10肿瘤专家眼中的癌症治疗饮食与健康·下旬刊(2017年4期)2017-05-26无误解无伤害关于淋巴瘤，我们只要正解！现代家庭·生活版(2016年11期)2016-11-09