谢中华， 苗 强， 魏 彬， 张君龙， 罗俐梅， 蔡 蓓， 牛 倩
（四川大学华西医院实验医学科，四川 成都 610041）
随着现代医学的快速发展，临床免疫检验技术不断更新换代，经历了放射免疫技术、酶联免疫技术到化学发光、电化学发光等检测方法的演变，逐步实现了临床免疫检测的高通量、自动化、标准化甚至智能化，从根本上提升了检测的灵敏度、精密度以及准确性[1]。然而，一些干扰因素的存在，往往难以避免的会导致假性结果[2]。本研究对1例体检者游离前列腺特异抗原（free prostate specific antigen，f-PSA）检测结果异常升高的处理与分析方法进行总结。
1.1 研究对象
刘某，男，28岁，于2019年8月至四川大学华西医院进行健康体检。实验室检查结果：血常规、肝功能、肾功能、甲功能、血糖、尿常规均正常，三酰甘油2.40 mmol/L（参考区间为0.29～1.83 mmol/L），尿酸525 μmol/L（参考区间为240～490 μmol/L），同型半胱氨酸 28.4 μmol/L（参考区间为＜15 μmol/L），肿瘤标志物检测结果见表1。本例体检者的前列腺特异抗原结果异常，表现为f-PSA结果明显大于总前列腺特异抗原（total prostate specific antigen，t-PSA）结果，f-PSA/t-PSA比值达到13.92。随机选取当天检测结果正常的样本1例作为正常对照。
表1 本例体检者肿瘤标志物检测结果
1.2 仪器与试剂
MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法），UniCel DxI 800全自动化学发光分析仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套试剂（微粒子化学发光法）。
1.3 聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）沉淀法[3]
1.3.1 25% PEG6000溶液配制 用电子天平精确称重25 g PEG6000，放至容器中，加入60 mL去离子水充分溶解，振荡混匀15 min，加去离子水至100 mL，配制成25% PEG6000溶液，该溶液可在20～25 ℃条件下稳定7 d。
1.3.2 样本处理 将血清样本和25% PEG6000溶液按1∶1的比例进行混合，振荡混匀10 s，7 891 ×g 离心5 min，取上清液进行检测，检测结果乘以2为最终结果。
1.3.3 回收率 回收率公式：回收率（%）=（样本处理后的检测值×2/样本处理前的检测值）×100。回收率＜40%，说明存在大分子蛋白质干扰。
2.1 检测流程
采用电化学发光法检测肿瘤标志物，发现f-PSA检测结果异常后即对当日质控及其他样本的检测结果进行复核，未发现异常。对样本的t-PSA和f-PSA项目进行复查，复查后f-PSA结果仍大于t-PSA结果，排除偶然误差。随后采用微粒子化学发光法进行检测，结果显示t-PSA结果无明显变化，f-PSA结果降低，f-PSA/t-PSA比值为0.41，结果合理，见表2。由此推测该体检者体内存在干扰电化学发光法检测f-PSA的物质，导致f-PSA结果假性升高。为了验证干扰物质的存在，采用PEG沉淀法对样本进行处理后再次使用电化学发光法进行检测。处理流程见图1。
图1 f-PSA检测结果异常样本的处理及分析流程
2.2 PEG沉淀法处理后电化学发光法检测结果分析
经PEG沉淀法处理后采用电化学发光法再次检测，t-PSA结果基本无变化，f-PSA检测结果由3.800 ng/mL降至0.104 ng/mL，回收率为2.74%，该检测结果与微粒子化学发光法的检测结果相符。正常对照者血清t-PSA和f-PSA结果在使用PEG沉淀法处理前后变化不大。见表2。
表2 使用PEG沉淀法处理前后不同检测系统检测结果比较
本例体检者血清f-PSA异常升高，导致f-PSA/t-PSA比值倒置，由于血清t-PSA包含了f-PSA和结合前列腺特异抗原（complexed prostate specific antigen，c-PSA），因此该样本f-PSA/t-PSA比值倒置为不合理的结果模式。经PEG沉淀法处理后，f-PSA结果降低，f-PSA/t-PSA比值恢复正常。由此推测本例体检者体内可能存在某种干扰物质，导致电化学发光法检测f-PSA的结果假性升高。一般的干扰物质包括异嗜性抗体、自身抗体、类风湿因子（rheumatoid factor，RF）、人抗动物抗体以及其他一些结合球蛋白等。查阅瑞士罗氏公司t-PSA、f-PSA试剂说明书和美国贝克曼库尔特公司f-PSA试剂说明书，发现3个项目的检测原理均为双抗体夹心法，其捕获抗体和标记抗体均采用鼠源性单克隆抗体，但检测方法不同，瑞士罗氏公司t-PSA、f-PSA项目使用的检测方法为电化学发光法，而美国贝克曼库尔特公司f-PSA项目使用的是磁微粒化学发光法。同时，瑞士罗氏公司t-PSA和f-PSA试剂中使用的是不同的鼠源性单克隆抗体，t-PSA试剂中的单克隆抗体可结合f-PSA和c-PSA，而f-PSA试剂中单克隆抗体仅能结合f-PSA；
t-PSA试剂中磷酸盐缓冲液的pH值为6.0，而f-PSA试剂中的磷酸盐缓冲液pH值为7.4。当采用结构不同的鼠源单克隆抗体或处于不同pH值环境时，均可能造成异嗜性抗体的干扰。由于检测试剂中使用的是不同的鼠源性单克隆抗体，因此不排除不同鼠源的人抗小鼠抗体（human anti-mouse antibody，HAMA）对检测造成干扰，也可能为其他异嗜性抗体或自身抗体等蛋白质分子与瑞士罗氏公司f-PSA试剂中的鼠源性单克隆抗体发生非特异性结合，导致本例体检者f-PSA结果假性升高。但限于实验室条件，本研究未能鉴定干扰物质的具体种类，但采用PEG沉淀法处理样本能有效消除干扰物质对f-PSA检测结果的影响。
自身抗体、异嗜性抗体、人抗动物抗体等会对多种免疫检测方法造成干扰[2，4-5]，涉及多种检测项目，如促肾上腺皮质激素[5]、糖类抗原19-9[6]、甲状腺激素[7]等，还有异嗜性抗体干扰多项肿瘤标志物检测结果的报道[8]。黎锦等[4]阐述了异嗜性抗体、人抗动物抗体和自身抗体等对免疫检测项目的干扰机制，在双抗体夹心法中，异嗜性抗体可能桥接捕获抗体和标记抗体，导致结果假性升高；
异嗜性抗体也可能阻碍样本中抗原和检测抗体结合，从而导致结果假性降低。自身抗体主要干扰其相应自身抗原的检测，如抗心肌肌钙蛋白（cardiac troponin I，cTnI）抗体能与cTnI特异性结合形成免疫复合物，使cTnI检测结果呈假阴性，进而导致急性心肌梗死的延迟诊断[9]。由此可见，这些干扰物质会引起某些项目检测结果假性升高或降低，导致检测结果与临床表现不符，给临床诊疗带来困扰，甚至造成误诊或漏诊。
本例体检者于2020年8月再次到四川大学华西医院体检，此时本实验室已将MODULAR ANALYTICS E170全自动免疫分析仪更换为cobas e801全自动电化学发光免疫分析仪（瑞士罗氏公司），但检测原理和试剂均无变化。结果显示，本例体检者血清f-PSA检测结果仍异常升高，f-PSA/t-PSA比值倒置；
采用PEG沉淀法处理样本后其f-PSA检测结果下降，f-PSA/t-PSA比值恢复到合理范围，再次印证了本例体检者体内存在干扰电化学发光法检测f-PSA的物质。目前，国内对异嗜性抗体干扰f-PSA检测结果的相关报道较少。PEDROSA等[10]使用UniCel DxI 800全自动化学发光分析仪检测f-PSA，发现f-PSA异常升高，f-PSA/t-PSA比值倒置；
随后使用异嗜性封闭管（heterophilic blocking tube，HBT）处理5份样本后，f-PSA结果降低了83.02%～99.79%，表明存在异嗜性抗体的干扰，导致f-PSA结果假性升高。由此可见，异嗜性抗体可影响不同检测系统对f-PSA的检测，因此检测系统不是导致f-PSA假性升高的因素。
综上所述，本例体检者体内存在干扰电化学发光法检测f-PSA的因素，导致f-PSA检测结果假性升高，使用PEG沉淀法处理样本可消除该影响。虽然无法避免一些影响因素，但据相关报道，在f-PSA和t-PSA分析中，异嗜性抗体的干扰发生率仅为1%和1.2%[11]。结合本研究，我们认为，检验科工作人员应当充分了解免疫检测系统中可能存在的干扰因素以及可能的影响，同时应该掌握必要的临床专业知识。在临床检测中发现不合理的检测结果时，如检测结果存在矛盾、检测结果与临床症状不相符、本次结果与历史结果差距较大、接受过动物免疫制剂治疗导致结果难以解释等，可采用PEG沉淀法或使用异嗜性抗体阻断剂对样本进行处理，也可以根据实验室条件采用不同的检测系统进行检测，从而消除或降低干扰因素的影响，为临床提供准确、可靠的检测结果。
说明：本研究由第一作者谢中华于四川大学华西医院进修期间完成，第一作者谢中华现工作单位为内江市东兴区人民医院。
猜你喜欢 化学发光假性本例 丰富多彩的分式方程的根初中生学习指导·提升版(2020年5期)2020-09-10假性肠梗阻，你要知道学习与科普(2019年31期)2019-09-10孕晚期要注意假性宫缩黄河黄土黄种人(2018年12期)2018-01-14荧光/化学发光探针成像检测超氧阴离子自由基的研究进展分析化学(2017年12期)2017-12-25我国学者仿萤火虫研制出高亮发光的水凝胶新天地(2017年12期)2017-12-21化学发光在生化分析中的应用研究进展分析化学(2016年12期)2017-02-04都是忽视“O和1”的错数理化学习·高三版(2015年3期)2015-10-21氧化锌纳米颗粒增强鲁米诺EDTA化学发光测定咖啡酸分析化学(2015年7期)2015-07-30贯穿缝合并加压包扎治疗假性囊肿切除后皮肤潜行剥脱伤7例中国民族民间医药·下半月(2014年4期)2014-09-26绕组重绕数据的索取职业·中旬(2009年12期)2009-06-01