贺红柳，崔美英，王丰
郑州大学第一附属医院病理科，郑州 450052
食管癌是全球恶性程度最高的六大肿瘤之一，几十年来，食管癌的发病率在全球范围内不断上升，病死率居第六位。同时中国是全球食管癌发病率和病死率最高的国家，据统计，中国每年大约有221万人死于该病，流行病学显示中国农村地区食管癌的发病率是城镇地区的2～10倍，城乡分布不均匀，且具有明显的家族聚集现象，一般表现为家族多个成员患有食管癌。目前，食管癌的发病原因并未完全明确，可能与肥胖、吸烟、饮酒、饮食习惯等危险因素有关。手术切除术、内镜切除术和放化疗均为主要治疗手段，但疗效均不尽人意，患者5年生存率较低，仅为15%左右。由于食管癌早期症状表现不明显，早期筛查手段效果有限，大多数患者发现时已为疾病中晚期，丧失了最佳治疗时机，因此寻找有效的食管癌生物标志物具有重要临床意义。miRNA在正常细胞的发育、分化、凋亡及调控靶mRNA的表达中有重要作用，同时也在肿瘤发生、侵袭、转移和化疗中有一定的作用，miRNA的组织特异性和疾病特异性表达可作为肿瘤诊断、预测和治疗的研究基础。本研究通过分析miRNA-126、miRNA-26a在食管癌中的表达及其与患者临床特征的关系，以期为临床诊治提供依据，现报道如下。
1.1 一般资料
收集2014年1月至2016年3月于郑州大学第一附属医院行食管癌手术切除患者的病历资料。纳入标准：①符合《食管癌临床多学科综合诊断与鉴别诊断》中相关诊断标准，且经手术病理检查确诊；
②采用手术切除治疗，且术前未接受过相关治疗；
③临床资料完整。排除标准：①合并其他类型肿瘤；
②合并自身免疫性疾病和肾脏损伤。根据纳入、排除标准，共纳入113例食管癌患者，其中男59例，女54例；
年龄37～79岁，平均（59.12±4.79）岁；
肿瘤部位：食管上段23例，中段54例，下段36例；
病变长度：≥3 cm 94例，＜3 cm 19例；
分化程度：高分化19例，中低分化94例；
TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期70例；
浸润深度：黏膜层～肌层74例，肌层以外39例；
有淋巴结转移61例，无淋巴结转移52例。收集113例患者的食管癌组织和癌旁组织各113例。
1.2 检测方法
检测所有患者血清miRNA-126、miRNA-26a的表达水平。所有患者禁食12 h以上，采集清晨空腹静脉血4 ml，经过离心处理取上清液置于-80℃冰箱保存。采用定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测患者血清miRNA-126、miRNA-26a的相对表达量。提取总RNA，使用miRNA qRT-PCR检测试剂盒进行miRNA的逆转录过程，轻柔混匀qPCR预混液短暂离心，将预混液分别加入PCR八连管中，确保其集中于PCR八连管底部，使用定量PCR仪，设置PCR程序并进行定量PCR反应。反应结束收集数据，对数据Ct值进行分析，采用2计算血清miRNA-126、miRNA-26a的相对表达量。
1.3 统计学方法
2.1 miRNA-126、miRNA-26a相对表达量的比较
食管癌组织中miRNA-126和miRNA-26a相对表达量均明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P
＜0.01）（表1）。ROC曲线分析结果显示，当约登指数最大时，对应的miRNA-126和miRNA-26a为0.92和2.03，可作为诊断食管癌的临界值（图1）。miRNA-126和miRNA-26a在食管癌组织中的表达水平呈正相关（r
=0.757，P
＜0.01）。
表1 食管癌组织和癌旁组织中miRNA-126、miRNA-26a相对表达量的比较（±s）
图1 miRNA-126、miRNA-26a诊断食管癌的ROC曲线
2.2 不同临床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表达情况的比较
不同性别、年龄、肿瘤部位、病变长度和浸润深度的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表达情况比较，差异均无统计学意义（P
＞0.05）；不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表达情况比较，差异均有统计学意义（
P
＜0.01）。（表2）
表2 不同临床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表达情况的比较（n=113）
食管癌是一类常见的消化系统疾病，世界范围内每年约有48万新发病例，死亡人数可达40多万，中国食管癌每年新增人数达15万以上，发病率仅次于肺癌、胃癌和肝癌。其发病原因复杂，与饮食习惯、感染、食管反流病、遗传、吸烟、喝酒等均有一定关联。由于食管癌早期无明显表现，当患者出现胸痛、吞咽困难等临床症状时，病情已发展至中晚期，致使食管癌患者5年生存率较低。现代分子生物学认为，肿瘤的发生是多基因共同作用的结果，癌性基因过度表达和抑癌基因表达减弱、细胞增殖增强和凋亡减少等都在肿瘤发生发展中起重要作用。探究食管癌的生物学机制和基因表达对其诊断和治疗均有重要临床意义。许多研究证实miRNA参与到人类肿瘤的发生和发展中，miRNA的具体作用机制尚未完全明确，目前认为主要与以下两个方面因素有关：①某些miRNA可能为人类潜在的原癌基因或抑癌基因；
②miRNA可能为调控肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡提供了有利因素。血清miRNA的表达均可通过qRT-PCR技术进行检测，血清miRNA水平的表达也可为肿瘤的诊断、治疗提供新思路。
本研究中，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌组织中均呈低表达，miRNA-126和miRNA-26a的表达情况与食管癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移关系密切，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌组织中的表达水平呈正相关，提示miRNA-126和miRNA-26a在食管癌的发生发展中具有重要调控作用。相关研究表明，miRNA-126在消化系统中发挥着抑癌基因的重要作用，当miRNA-126呈低表达，血管内皮黏附因子水平升高，参与新生血管形成，促使肿瘤细胞增殖。有研究发现，恢复miRNA-126的表达降低了乳腺癌细胞的生长和增殖时间，表明miRNA-126低表达可加快肿瘤发展。miRNA-26a是血管平滑肌功能和新内膜增生的重要调节因子，不仅可以调节内皮细胞的功能，同时对血管平滑肌细胞也具有明显靶向调节作用，miRNA-26a的上调可抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移。此外，还有研究发现miRNA-26a与肿瘤细胞的增长和转移也有一定的联系，但有关miRNA-26a表达水平与食管癌的相关研究并不多见，本研究中发现，食管癌分化程度越低、病理分期越晚、出现淋巴结转移的患者，血清miRNA-26a的表达水平越低，因此miRNA-26a可作为食管癌患者预后的生物学指标。综上所述，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌中均呈低表达，且与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移有紧密联系，这为食管癌的发生机制和诊治提供了新思路。
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