摘要：运用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术，对中华倒刺�的６种组织（脑、眼睛、心脏、肝脏、肾脏、肌肉）中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、酯酶（ＥＳＴ）进行了初步研究，并对这３种酶在各组织中的同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明，中华倒刺�的３种同工酶系统具有组织特异性。ＬＤＨ检测到经典的５条谱带，由３个基因位点编码，Ｃ位点仅在肝脏组织中表达；ＭＤＨ在５种组织（除肌肉外）中检测到３条酶带，仅为细胞质型，肌肉组织中同时表达了细胞质型和线粒体型；ＥＳＴ至少由５个基因位点编码，同工酶酶谱复杂，肝和肾的活性表达较强。
关键词：中华倒刺�；同工酶；组织特异性
中图分类号：Ｓ９６５．１９９ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）24－5206-05
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｓｏｚｙｍｉｃ Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ Ｊｕａｎ１，２，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｙｅ１，２，ＣＡＩ Ｙａｎ－ｚｈｉ２，ＬＵ Ｔａｏ３，ＱＩＮ Ｘｉａｏ－ｙａｎ３
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７９，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００７１， Ｃｈｉｎａ； ３．Ｚｉｇｕｉ Ｇｏｖｅｒｎｉｎｇ Ｓｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ａｄｍｉｓｔｒａｔｉｏｎ ，Ｖｅｓｓｅｌ Ｃｈｅｃｋｉｎｇ ａｎｄ Ｐｏｒｔ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ，Ｚｉｇｕｉ ４４３６００， Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｖｅｒｔｉｃａｌ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， lａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）， ｍａｌａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ （ＭＤＨ） ａｎｄ ｅｓｔｅｒａｓｅ （ＥＳＴ） ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｆｒｏｍ ｓｉｘ ｔｉｓｓｕｅｓ（ｂｒａｉｎ， ｅｙｅ， ｈｅａｒｔ， ｌｉｖｅｒ， ｋｉｄｎｅｙ ａｎｄ ｍｕｓｃｌｅ） ｏｆ ａｄｕｌｔ Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｗｅｒｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｌｏｃｉ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｉｎ ｅｖｅｒｙ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｆｉｖｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ＬＤＨ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅｓ， ｗｈｉｃｈ were ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｌｏｃｉ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｔｅ Ｃ ｗａｓ ｏｎｌｙ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｌｉｖｅｒ． Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＭＤＨ ｉｓｏｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ｗａｓ ｔｈｒｅｅ ｉｎ ｆｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｅｘｃｅｐｔ ｍｕｓｃｌｅ， ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｓ－ＭＤＨ． Ｂｏｔｈ ｓ－ＭＤＨ ａｎｄ ｍ－ＭＤＨ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ． ＥＳＴ ｉｓｏｚｙｍｅ ｗａｓ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｆｉｖｅ ｌｏｃｉ ａｔ ｌｅａｓｔ． Ｔｈｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｐａｔｔｅｒｎ ｗａｓ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ； ｉｓｏｚｙｍｅ； ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ
同工酶的概念最早是由Ｍａｒｋｅｒｔ和Ｍｏｌｌｅｒ［１］在１９５９年提出，是指催化相同化学反应，但其性质不尽相同的一类酶，它是普遍存在的，在同一物种的不同个体或同一细胞的不同部位，如细胞膜、细胞质和线粒体等细胞器，以及生物生长发育的不同时期和不同代谢条件下，都有同工酶的存在，这类酶对细胞的发育及代谢调节都很重要。同工酶是由染色体上不同的基因位点或同一位点的等位基因编码的，是基因型的生化表现型，反映了编码酶蛋白的ＤＮＡ序列信息。同工酶能催化相同的反应，是因为其活性中心的结构有类同之处，而物理特性、催化性质以及免疫特性的区别，则是由于分子组成和结构上有一定差异，酶谱的变化反映了等位基因和位点的变化。Ｂｕｔｈ等［２］认为利用凝胶电泳技术，能够得到较好的同源性和可比性的同工酶谱，通过对酶谱的进一步分析，可以较深入、直接地了解物种的遗传信息，包括群体遗传结构、个体发育过程同工酶的表达和组织特异性等内容，是分析生物的发育、遗传、系统进化和生理过程的有效探针。
中华倒刺�［Ｓｐｉｎｉｂａｒｂｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｌｅｅｋｅｒ）］俗称青波、乌鳞、青板，属脊椎动物门，硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，�亚科，倒刺�属，为淡水温水性鱼类，性活泼，喜成群栖息于底层多为乱石的流水中，主要分布于长江中上游的干、支流流域的水体中，是我国长江流域土著淡水名优鱼类［３］。中华倒刺�的肉质肥美，细嫩多脂，并且具有一定药效，有壮阳补中之功效，被人们列为上佳食用鱼。因其具有个体大、生长快、食性杂、饲料来源广、抗病能力强等特点，已开始成为一种池塘、网箱养殖的淡水名优鱼类品种，是重要的土著名优经济鱼类之一［４，５］。目前国内对中华倒刺�的研究主要在生物学特征［３］、胚胎及幼鱼的发育［６，７］和繁育技术［８－１０］等方面，同时也逐渐展开遗传分子学方面的研究［１１，１２］，但是有关中华倒刺�同工酶的表达研究未见报道。本研究主要从生化遗传学角度出发，用不连续的聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对中华倒刺�乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、酯酶（ＥＳＴ）的组织特异性进行初步分析，探讨其同工酶系统的遗传基础，以期为中华倒刺�的遗传多样性分析、种质标准和种质鉴定提供生化遗传参数，同时为中华倒刺�的遗传育种和人工繁育提供科学依据。
１ 材料和方法
１．１ 试验原料
试验用中华倒刺�来源于嘉陵江、沱江以及人工饲养的鱼种，共９０尾，体格健壮、无病无伤的大规格鱼种为试验鱼，平均体重为（２９２．０４５±７７．５４１）ｇ，平均体长为（２３．９３５±２．２７３）ｃｍ。
１．２ 仪器和试剂
１．２．１ 仪器 ＤＹＹ－１０Ｃ型电泳仪（北京市六一仪器厂）、ＦＡ２００４型电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）、ＹＰ２０２Ｎ型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、ＧＬ２０－Ｂ型高速冷冻离心机（中国科学院武汉科学仪器厂）；富士数码相机ＦｉｎｅＰｉｘＦ７５ＥＸＲ（苏州富士胶片映像机器有限公司）；LRH-Z型生化培养箱（广东省医疗器械厂）；玻璃匀浆器（海门市华凯实验玻璃仪器有限公司）。
１．２．２ 试剂 丙烯酰胺、Ｎ，Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺、Ｔｒｉｓ-甘氨酸以及染色液中各种试剂均购于试剂公司。
１．３ 试验方法
１．３．１ 样品液的制备 首先将活鱼鳃弓基部剪断于水体中放血，在低温条件下迅速解剖，取出脑、眼睛、心脏、肝脏、肾脏和肌肉６种组织，用冰冻去离子水冲洗以除去组织血污，用滤纸吸去多余水分，称重后按１∶３（m／V，g∶mL）的比例加入０．１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（ｐＨ ７．０），并置于玻璃匀浆器中混匀（冰上操作），匀浆后于４ ℃冰箱内静置１ ｈ后进行分离。将匀浆液装入离心管，按２∶１（体积比）加入氯仿，振荡混匀后４ ℃放置１０ ｍｉｎ，１５ ０００ ｒ／ｍｉｎ，４ ℃离心３０ ｍｉｎ，取上清液按１∶１的体积比加入甘油，置－２０℃冰箱中保存备用。
１．３．２ 不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳 聚丙烯酰胺凝胶参照张庆朝等［１３］的方法制备。按１∶１的比例混合酶液样品与指示剂（２０％的蔗糖溶液加入适量的溴酚蓝），每个点样孔加样３０～５０ μＬ。电极缓冲液为ｐＨ ８．３的Ｔｒｉｓ－甘氨酸溶液。
４ ℃条件下，恒压５０ Ｖ预电泳３０ ｍｉｎ，经过预电泳后用微量进样器加样。浓缩胶电泳时电压为５０ Ｖ，当样品完全进入分离胶后升高电压至２００ Ｖ，直至溴酚蓝指示剂距分离胶底部１ ｃｍ时停止电泳，总电泳时间为３～４ ｈ。
１．３．３ 染色和固定 电泳结束后将凝胶板取下，在３７℃染色液中避光染色至谱带出现，乳酸脱氢酶的染色参照张庆朝等［１３］的方法，苹果酸脱氢酶和酯酶的染色参照赵赣等［１４，１５］文中的经典染色法，略加修改。显色至出现清晰条带后，将凝胶板用去离子水漂洗２～３次，在７％的冰醋酸溶液中固定。
１．３．４ 照相和酶谱分析 对染色和固定好的凝胶板用富士数码相机进行拍照，依照熊全沫等［１６，１７］的方法分析和命名同工酶酶谱，以同工酶缩写名称的大写代表酶蛋白，小写代表编码的基因；从阴极向阳极方向依次以１、２、３…等命名一种酶的多个基因座位，而ＬＤＨ以Ａ、Ｂ、Ｃ命名。若该座位有１个以上等位基因时，各等位基因按英文字母顺序命名（ａ，ｂ，ｃ…）。
２ 结果与分析
２．１ 乳酸脱氢酶
一般认为，ＬＤＨ为 ２个位点编码的四聚体酶，Ｌｄｈ－ａ和Ｌｄｈ－ｂ基因编码了Ａ和Ｂ两个亚基，再由这两个亚基随机组合成Ａ４、Ａ３Ｂ、Ａ２Ｂ２、ＡＢ３、Ｂ４ ５种同工酶。由图1可知，在中华倒刺�的６种组织中分离出５～９条ＬＤＨ同工酶谱带，表明中华倒刺�ＬＤＨ同工酶的丰富多样性并具有组织特异性。其中，６种组织都具有ＬＤＨ的５条经典谱带，而其他的谱带是ＬＤＨ同工酶复等位基因表达或者合成后酶亚基修饰的结果，这种化学修饰导致的ＬＤＨ酶带多于典型的５条带在硬骨鱼类中普遍存在［１８］。
中华倒刺�各组织的Ａ和Ｂ两位点均表达形成了５种四聚体酶，但其表达程度各不相同。其中，脑和心的ＬＤＨ各同工酶相对表达活性类似，为Ｌｄｈ－Ｂ４＞Ｌｄｈ－ＡＢ３＞Ｌｄｈ－Ａ２Ｂ２＞Ｌｄｈ－Ａ３Ｂ＞Ｌｄｈ－Ａ４，但心脏组织中ＬＤＨ同工酶的活性表达总体上要强于脑。眼睛为典型的５条谱带，Ｌｄｈ－Ａ２Ｂ２的活性最强。肝脏和肾脏中的ＬＤＨ同工酶条带可达９条，其丰富性与它们行使复杂的生理功能相适应。肌肉组织中ＬＤＨ各同工酶相对活性为Ｌｄｈ－Ａ４＞Ｌｄｈ－Ａ３Ｂ＞Ｌｄｈ－Ａ２Ｂ２＞Ｌｄｈ－Ｂ４＞Ｌｄｈ－ＡＢ３。
在中华倒刺�肝脏组织的ＬＤＨ酶带中出现了靠近阴极的特异性“Ｃ带”，即由Ｌｄｈ－ｃ基因编码的一条同聚体Ｃ４酶带。Ｍａｒｋｅｒｔ等［１９］通过对ＬＤＨ基因演化的研究，认为Ｌｄｈ－ｃ基因是由Ｌｄｈ－ｂ基因复制而产生的，它在低等鱼类的各种组织中广泛存在，在高等鱼类中却特异性限制在某种组织内（眼睛或肝脏）。在Ｃ４酶带下方有２条浅带，可能是Ａ、Ｂ位点的和Ｃ位点的杂合性表达。
２．２ 苹果酸脱氢酶
硬骨鱼类的ＭＤＨ同工酶存在有互相不形成异聚体的细胞质（ｓ－ＭＤＨ）和线粒体（ｍ－ＭＤＨ）两种类型，均是由２个基因位点（Ｍｄｈ－Ｃ，－Ｄ和Ｍｄｈ－Ａ，－Ｂ）编码的二聚体［２０］。中华倒刺�ＭＤＨ同工酶酶谱中的条带数以及谱带的强弱不尽相同，所以该酶具有组织特异性。
一般认为，ｓ－ＭＤＨ移动较快，ｍ－ＭＤＨ较慢。所以推测图中Ｍｄｈ－１和Ｍｄｈ－２为线粒体型，Ｍｄｈ－３、Ｍｄｈ－４和Ｍｄｈ－５为细胞质型，且均由２个位点编码。中华倒刺�的ｓ－ＭＤＨ在６种组织中均有分布，在脑、眼睛、心脏、肝脏、肾脏中表现为典型的二聚体３条酶带，在肌肉中表现为２条酶带，其中肝中的ＭＤＨ活性表达最强，肾次之，眼睛的活性最弱，Ｍｄｈ－３表达不明显。ｍ－ＭＤＨ仅在肌肉组织中有所表达，编码形成２条酶带，即Ｍｄｈ－１和Ｍｄｈ－２。
２．３ 酯酶
鱼类的ＥＳＴ同工酶绝大部分为单体，由一个亚基组成，一般有２个以上的等位基因编码，多态现象非常普遍，使其酶谱非常复杂［２１］。中华倒刺�的６种组织中都有ＥＳＴ同工酶活性，但组织间的酶带在数量和活性上都存在着明显差异，显示出ＥＳＴ具有明显的组织特异性。
根据同工酶酶谱可推测中华倒刺�的ＥＳＴ至少有Ｅｓｔ－１、Ｅｓｔ－２、Ｅｓｔ－３、Ｅｓｔ－４和Ｅｓｔ－５ ５ 个基因位点编码，其中Ｅｓｔ－２、Ｅｓｔ－３、Ｅｓｔ－４和Ｅｓｔ－５均有多态性。Ｅｓｔ－１在６种组织中均有表达，编码为１条酶带，在肝脏中活性表达最强，肾次之；Ｅｓｔ－２在眼和肝中编码为２条酶带，脑、心脏、肾脏、肌肉中此位点表达为１条酶带，心和肌肉中表达较弱；Ｅｓｔ－５仅在眼睛中表达，编码为２条酶带，眼中无Ｅｓｔ－３、Ｅｓｔ－４位点；肌肉中有Ｅｓｔ－１、Ｅｓｔ－２、Ｅｓｔ－３位点，各编码１条酶带。
３ 讨论
从试验结果来看，中华倒刺�ＬＤＨ、ＭＤＨ和ＥＳＴ在６种组织中位点表达模式、等位基因以及活性表达等方面的差异比较明显，这与硬骨鱼类同工酶具有组织特异性［１８，２３，24］的结论相符。中华倒刺�同工酶的组织特异性应该与其组织特定的生理功能相关，是机体在发育过程中组织分化并特异性执行各自功能以期在特定环境下适应生存条件的结果。
３．１ 乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的组织特异性
ＬＤＨ同工酶电泳图谱的特征反映了基因的活动与调控，即反映了遗传表达的本质，中华倒刺�的ＬＤＨ同工酶是由Ａ、Ｂ、Ｃ ３个位点决定的，Ｃ位点具有组织的差异，仅在肝脏组织表达。一般认为脊椎动物ＬＤＨ同工酶在胚胎发育和细胞分化中具有显著的分化调控模式，其表现出高度的发育和组织特异性［２２］。中华倒刺�的ＬＤＨ同工酶组织特异性明显，Ｌｄｈ－Ａ４在脑、心和肾脏组织中优势表达，Ｌｄｈ－Ｂ４在肌肉组织中优势表达。
作为特异基因产物的Ｃ带，显然是判别肝细胞的有效标志，不同的同工酶具有不同的性质，Ｌｄｈ－ｃ基因仅在肝脏组织中表达，这与肝脏具有旺盛的代谢功能是相适应的，因为Ｌｄｈ－Ｃ４的底物范围比其他同工酶广泛的多，因而可为肝代谢提供充足的能源［２3］。从试验结果可看出，中华倒刺�ＬＤＨ同工酶组织特异性与各组织器官所处的生理条件和机能是相一致的。
３．２ 苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）的组织特异性
中华倒刺�的ＭＤＨ同工酶也分细胞质型（ｓ－ＭＤＨ）和线粒体型（ｍ－ＭＤＨ），由不同的基因位点编码，其催化功能也不相同。ＭＤＨ同工酶是三羧酸循环中重要的脱氢酶之一，三羧酸循环对于任何组织都起着重要的作用。ＭＤＨ参与葡萄糖异生或糖酵解过程，ｍ－ＭＤＨ可以把苹果酸转为草酰乙酸而提供能量，而ｓ－ＭＤＨ同工酶则行使其逆反应，它使草酰乙酸还原成苹果酸，再成为丙酮酸进入线粒体，参与乙酰ＣoＡ的脂肪合成过程。这两类同工酶相互协调作用，以保证机体代谢的正常运行。中华倒刺�的脑、眼睛、心脏、肝脏、肾脏只表达了ｓ－ＭＤＨ而且谱带数量相同，但其活性不同，虽然存在着组织特异性差异但其差异不大，可能是由于这些组织对能量的需求差异不大所造成的。在肌肉中同时表达了ｓ－ＭＤＨ和ｍ－ＭＤＨ，这也与其代谢功能密切相关。
３．３ 酯酶（ＥＳＴ）的组织特异性
ＥＳＴ同工酶在酯代谢和生物膜的结构方面发挥作用，属于水解类酶，是能催化酯类化合物水解并进入中间代谢的重要酶，其遗传基础和亚基组成尚无定论，一般为单链或二聚体［２4］。由于ＥＳＴ是生命活动的基础代谢酶，在中华倒刺�的６种组织中均有表达，但从图谱中可以看出，在不同的组织间，ＥＳＴ同工酶具有明显的组织差异性，在肝脏和肾脏中表达较强。因为ＥＳＴ同工酶属于催化酯类化合物水解的酶系，可能与机体的解毒作用密切相关，这与肝脏具有解毒作用相适应。
３．４ 同工酶组织特异性产生的原因
中华倒刺�同工酶的组织特异性主要表现在酶谱带数量和活性表达强弱这两个方面。同工酶的表达是机体在发育过程中内在基因调控机制造成的，其组织特异性的产生可能有多方面的原因。一方面可能是由于在不同组织中的基因位点不是同时表达，造成组织之间谱带数量的不同。另一方面可能是基因表达后受到不同因子的调控以配合各种组织执行不同生理功能，因而造成组织间同种同工酶在含量以及活性表达上的差异。不同组织同工酶的特异性与其代谢功能密切相关，如中华倒刺�的同工酶酶谱显示出Ｌｄｈ－ｃ基因在肝中特异表达，ＭＤＨ和ＥＳＴ都是在肝中的活性表达最强，而肝脏作为一种重要的内脏器官，具有消化、分泌及解毒等多种功能，所以同工酶亦表现出复杂的多态性；在肌肉组织中，Ｌｄｈ－Ｂ４优势表达，而且同时表达了ｓ－ＭＤＨ和ｍ－ＭＤＨ，这与肌肉作为机体一种重要的运动器官是相辅相成的。
参考文献：
［１］ ＭＡＲＫＥＲＴ Ｃ Ｌ， ＭＯＬＬＥＲ Ｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ：ｔｉｓｓｕｅ ｏｎｔｏｇｅｎｅｎｔｉｃ，ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｔｅｒｎｓ［Ｊ］． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１９５９，４５：７５３－７６３．
［２］ ＢＵＴＨ Ｄ Ｇ，ＤＯＷＬＩＮＧ Ｔ Ｅ， ＧＯＬＤ Ｊ Ｒ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ［Ａ］．ＷＩＮＦＩＥＬＤ Ｉ Ｊ，ＮＥＬＳＯＮ Ｊ Ｓ． Ｃｙｐｒｉｎｉｄ ｆｉｓｈｅｓ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ， ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ［Ｃ］． Ｌｏｎｄｏｎ： Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ，１９９１.８３－１１８．
［３］ 蔡焰值，何长仁，蔡烨强，等． 中华倒刺�生物学初步研究［Ｊ］． 淡水渔业，２００３，３３（３）：16-18．
［４］ 钱名全．中华倒刺�［Ｊ］．湖南农业，２００４（１２）：１５．
［５］ 李 萍，王宝森．中华倒刺�［Ｊ］．生物学通报，２００８，４３（８）：１７－１８．
［６］ 黄洪贵．中华倒刺�胚胎与仔鱼发育的观察［Ｊ］．江西农业大学学报，２００９，３１（６）：１０８７－１０９２．
［７］ 李 芹，唐洪玉．中华倒刺�仔稚鱼期消化酶及碱性磷酸酶活性变化的研究［Ｊ］． 水生态学杂志，２０１１（５）：８２－８５．
［８］ 罗江兰．中华倒刺�的人工繁殖及苗种培养技术［Ｊ］．水产养殖，２００３，２４（６）：１４－１５．
［９］ 蔡焰值，蔡烨强，何长仁．中华倒刺�人工繁殖技术研究［Ｊ］．淡水渔业，２００５，３５（１）：３５－３８．
［１０］ 鲁 斌，王晓斌，高勤国，等．中华倒刺�良种引进与池塘养殖模式研究［Ｊ］．安徽农学通报，２０１０，１６（９）：１８８－１９３．
［１１］ 朱必凤，邹佩贞，钟良明，等．三种倒刺�的ＲＡＰＤ种质鉴定［Ｊ］．南昌大学学报（理科版），２００６，３０（６）：５９７－６００．
［１２］ 熊美华，史 方，徐 念，等．中华倒刺�微卫星标记筛选及特征分析［Ｊ］．水生态学杂志， ２０１１，３２（１）：４０－４４．
［１３］ 张庆朝，王 慧，秦孜娟，等．鱼类乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究［Ｊ］．生物技术，１９９４，４（５）：３８－４０．
［１４］ 赵 赣，张守全，林武源，等．一种新的苹果酸脱氢酶同工酶染色法［Ｊ］．江西农业大学学报，２０００，２２（４）：５８９－５９０．
［１５］ 赵 赣，钱 芳，曹永长，等．酯酶同工酶的一种新染色法的初步研究［Ｊ］．江西农业大学学报，２００２，２４（３）：３８０－３８２．
［１６］ 熊全沫．鱼类同工酶谱分析（上）［Ｊ］．遗传，１９９２，１４（２）：４１－４４．
［１７］ 熊全沫．鱼类同工酶谱分析（下）［Ｊ］．遗传，１９９２，１４（５）：４７－４８．
［１８］ 唐章生．巴西鲷乳酸脱氢酶同工酶的初步研究［Ｊ］．水利渔业，２００１，２1（４）：９－１０．
［１９］ ＭＡＲＫＥＲＴ Ｃ Ｌ， ＳＨＡＫＬＥＥ Ｊ Ｂ ， ＷＨＩＴＴ Ｇ Ｓ． Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅ． Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ＬＤＨ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７５， １８９ （４１９７）：１０２－１１４．
［２０］ 蒋晓华，周铭东，瑞 光．滇池高背鲫鱼早期胚胎发育期间苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）同工酶的分析［Ｊ］．云南大学学报（自然科学版），１９９７，１９（４）：３８３－３８７．
［２１］ 方 丁，房世荣．同工酶在医学上的应用［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９８２．
［２２］ 薛国雄．乳酸脱氢酶同工酶研究进展［Ｊ］．生物研究进展，１９９２，１２（５）：２９－３２．
［２3］ 张庆朝，王 慧，秦孜娟，等． 泰山赤磷鱼同工酶的研究［Ｊ］．动物学研究，１９９４，１５（２）：６２－６７．
［２4］ 胡能书，万国贤．同工酶技术及其应用［Ｍ］．长沙：湖南科技出版社，１９８５．